Elcoroaristizabal
Martín X., Gamarra Fernández D., Fernández Martínez M., Gómez Busto F., Galdos
Alcelay L., M. de Pancorbo M. 2011,
Análisis
genéticos de polimorfismos en los genes CYP46A1, OGG1, CYP17A1
y CYP1A1 en pacientes con deterioro cognitivo leve tipo amnésico (aDCL)
y enfermedad de Alzheimer (EA) portadores del alelo APOEε4. Antropo, 24, 31-42. www.didac.ehu.es/antropo
Análisis genéticos de polimorfismos en los genes CYP46A1,
OGG1, CYP17A1 y CYP1A1 en pacientes con deterioro
cognitivo leve tipo amnésico (aDCL) y enfermedad de Alzheimer (EA) portadores
del alelo APOEε4
Genetic analysis of polymorphisms in CYP46A1, OGG1, CYP17A1 y CYP1A1 genes in patients with amnestic mild cognitive impairment
(aMCI) and Alzheimer Disease (AD) APOEε4 carriers
X. Elcoroaristizabal Martín1, D. Gamarra
Fernández1, M. Fernández Martínez2, F. Gómez Busto4,
L. Galdos Alcelay3, M. M. de Pancorbo1
1BIOMICS Research Group and DNA Bank
UPV/EHU. CIEA “Lucio
Lascaray” Research Centre. University of Basque Country UPV/EHU
(Vitoria-Gasteiz). Spain.
2Neurology Department. Hospital de Cruces. (Barakaldo-Vizcaya). Spain.
3Neurology Department. Hospital de Txagorritxu. (Vitoria-Gazteiz). Spain.
4 Integrated Care Center for Elderly San Prudencio. Vitoria-Gasteiz. Álava. Spain.
Correspondencia: M. M. de Pancorbo marianpancorbo@gmail.com
Palabras
clave: CYP46A1, OGG1, CYP17A1, CYP1A1, DCLa,
EA.
Keywords: CYP46A1, OGG1, CYP17A1,
CYP1A1, aMCI, AD.
Resumen
El objetivo de este estudio es
examinar la influencia de polimorfismos funcionales en los genes de la
24S-hidroxilasa (CYP46A1), 8- oxoguanina glicosilasa 1 (OGG1),
esteroide 17 alfa-monooxigenasa (CYP17A1) y la flavoproteína unida a
monooxigenasa (CYP1A1) como factores de riesgo para el deterioro
cognitivo tipo amnésico (DCLa) y la enfermedad de Alzheimer (EA), así como su
efecto en combinación con el gen de la apolipoproteína E (APOE).
Materiales y métodos.
Un total de 158 pacientes con DCLa, 163 pacientes con EA y 230 controles sanos
han sido analizados. Se utilizaron criterios clínicos y neuropsicológicos para
establecer los grupos diagnóstico. Los SNPs rs1052133 (OGG1), rs743572 (CYP17A1) y
rs4646903 (CYP1A1) y el SNP rs754203
(CYP46A1) y los genotipos de APOE fueron determinados usando las
técnicas de rtPCR y RFPLs, respectivamente. Se realizaron modelos de regresión
logística multinomial para determinar el riesgo de EA y DCLa.
Resultados. Ninguno de los alelos menos
representados en el grupo control, pertenecientes a los SNPs estudiados,
fue determinado como un
factor de riesgo independiente para el DCLa y la EA,
con excepción del alelo APOEε4 (DCLa, OR=2,67 (IC95% 1.69-4.21),
p<0.001 y EA, OR=4.75 (IC95% 3.02-7.47), p<0.001). Además, la estratificación mediante el alelo
APOEε4 no varió la ausencia de asociación observada.
Conclusión. Los SNPs presentes en los
genes candidatos rs754203 (CYP46A1), rs1052133 (OGG1), rs743572 (CYP17A1) no son
factores de riesgo independientes para el DCLa y la EA, salvo el alelo APOEε4.
Abstract
The aim of this study is to examine
the influence of the functional polymorphisms allocated in 24S-hydroxylase (CYP46A1),
8-oxoguanine glycosilase 1 (OGG1), steroid 17-alpha-monooxygenase (CYP17A1)
and the flavoprotein-linked monooxygenase (CYP1A1) genes as risk factors
for amnestic mild cognitive impairment (aMCI)and Alzheimer disease (AD), and
its effect in combination with the apolipoprotein E gene (APOE).
Materials and methods. A total of 158 aMCI patients, 163 AD patients and 230 healthy controls
were analyzed. Clinical criteria and neuropsychological test were used to
establish diagnostic groups. rs1052133 SNPs (OGG1), rs743572 (CYP17A1)
and rs4646903 (CYP1A1) and the SNP rs754203 (CYP46A1) and APOE
genotypes were determined using rtPCR and RFPLs techniques, respectively. Multinomial
logistic regression models were used to determine the risk of AD and aMCI.
Results. None
of least represented alleles in the control group, belonging to the studied
SNPs, were determined as an independent risk factor for aMCI and AD, with the
exception of allele APOEε4. In addition, stratification by APOEε4 allele did not change the lack of association
observed.
Conclusion. With the exception of APOEε4 allele, SNPs studied from candidate
genes (rs754203 (CYP46A1), rs1052133 (OGG1), rs743572 (CYP17A1)
and rs4646903 (CYP1A1)) are not independent risk
factors for aMCI and AD.
Introducción
La enfermedad de Alzheimer (EA) es la enfermedad neurodegenerativa más importante en las sociedades occidentales. Ante el continuo envejecimiento de la población se estima que la prevalencia de la EA se incremente en los próximos años, llegando a ser mayor entre los componentes de la sociedad más ancianos. Los fármacos pueden mejorar la calidad de vida de las personas con EA y la de sus cuidadores. Sin embargo, desafortunadamente, los tratamientos para combatir la EA no son efectivos en todos los enfermos y frecuentemente son modestos y temporales. Además, los tratamientos son más efectivos en las etapas iniciales de la EA, probablemente antes de que el daño ocasionado en el cerebro sea irreversible. Por lo tanto, un diagnóstico temprano junto a un tratamiento modificador de la enfermedad es una estrategia preventiva.
El deterioro cognitivo leve (DCL) se
considera una entidad clínica que es una fase prodrómica de la EA (Dubois et al. 2007). Entre los trastornos heterogéneos
que incluyen en el término DCL, el DCL tipo amnésico (DCLa) incluye a las
personas con síntomas de deterioro de la memoria, que con frecuencia se asocian
con una progresión posterior a EA (Maioli et al. 2007; Petersen 2004). La tasa de progresión de la
enfermedad entre los pacientes con DCLa es 6-10 veces mayor que en la población
que tiene un envejecimiento normal (Petersen et al. 1999).
La causa de la EA es desconocida, sin
embargo, varios factores se consideran implicados en esta enfermedad. Estos
incluyen, entre otros factores, la homeostasis del colesterol (Wollmer 2010), el incremento del estrés oxidativo
(Wiener et al. 2007) y los estrógenos (Etgen 2008; Wise 2003).
La
proteína implicada en el transporte de lípidos, apolipoproteína
E (ApoE), ha
sido implicada en la patogenia de la EA. ApoE participa
directamente en la homeostasis del colesterol en el cerebro (Eichner et al. 2002), interviniendo en el transporte del
colesterol entre astrocitos y neuronas (Michikawa et al. 2000). Además tiene
un efecto anti-oxidante (Jofre-Monseny
et al. 2008; Miyata and Smith 1996) y su
expresión cerebral es modulada por los estrógenos
(Wang et al. 2006). ApoE es polimórfica, tienen tres isoformas codificadas por tres
alelos del gen APOE, ε2, ε3 y ε4.
La eficiencia en
las funciones antes citadas disminuye en el orden APOEε2>
APOEε3> APOEε4. El alelo APOEε4 es
el principal factor de riesgo
genético de susceptibilidad
para la EA (Breitner et al. 1999), sin embargo, no se entiende completamente el mecanismo por el cual el
alelo APOEε4 tiene un impacto sobre la EA.
El colesterol en el cerebro es sintetizado localmente por lo que no depende de la ingesta nutricional. Se ha observado que el metabolismo del colesterol en los cerebros de enfermos de EA está alterado. La colesterol 24S-hidroxilasa es un enzima, codificada por el gen CYP46A1, implicado en la homeostasis del colesterol en el cerebro (Bjorkhem et al. 1998; Poirier 2003). Esta enzima elimina el exceso de colesterol, probablemente originado por el incremento del reciclaje de membrana o la pérdida neuronal, promoviendo el paso del 24S-hidroxicolesterol a través de la membrana hematoencefálica (BHE) (Bjorkhem et al. 1999).
El polimorfismo de
un solo nucleótido (SNP) rs754203 en CYP46A1 ha sido asociado con un incremento de los depósitos de Aβ en el
cerebro y péptidos Aβ y proteína tau fosforilada en el fluido
cerebroespinal, ya que este SNP podría influenciar en la funcionalidad de la
24S-hidroxilasa (Papassotiropoulos et
al. 2003).
El gen OGG1 codifica para la enzima 8 oxoguanina ADN glicosilasa 1. Esta enzima es la responsable de la escisión de las bases mutagénicas 8-hidroxi-2´deoxiguanosina (8-OHdG) originadas en el ADN tras su exposición a especies oxígeno reactivas (SOR) (Hollenbach et al. 1999; Le Page et al. 2005; Liu et al. ; Perillo et al. 2008). Estudios en modelos animales y humanos han sugerido que la 8 oxoguanina ADN glicosilasa 1 repara el daño oxidativo en las neuronas (Fukae et al. 2005; Lin et al. 2000; Verjat et al. 2000). Se ha observado que hay un incremento de 8-OhdG en los pacientes de EA (Mecocci et al. 2002). Existen pruebas que parecen apuntar hacia una posible modificación de la actividad de la enzima consecuencia del SNP rs1052133 presente en la secuencia de OGG1 (Kohno et al. 1998; Yamane et al. 2004). El daño oxidativo en el ADN parece ser crítico en el desarrollo de la EA, como consecuencia de la alteración de los sistemas de reparación (Lovell et al. 1999).
Los estrógenos tienen diversos efectos beneficiosos en el sistema nervioso central. El descenso en los niveles de estrógenos en mujeres post-menopáusicas se asocian con un mayor riesgo de desarrollar EA. El gen CYP17A1, miembro de la superfamilia de enzimas citocromo P450, codifica para la esteroide 17 alfa-monooxigenasa. Esta enzima está vinculada con la vía de neuroesteroidogénesis que produce 17β-estradiol en el cerebro (Hojo et al. 2004). El alelo G del SNP rs743572, vinculado a un lugar de unión SP-1, muestra una asociación contradictoria con los niveles de expresión de CYP17A1 (Carey et al. 1994; Nedelcheva Kristensen et al. 1999). No obstante, cambios en la expresión del gen parecen influenciar en los niveles de estrógenos (Feigelson et al. 1998; Setiawan et al. 2007). Sin embargo, el impacto real de este enzima en el riesgo de neurodegeneración es desconocido.
El
gen CYP1A1 esta relacionado con
el metabolismos de los estrógenos, generando catecolestrógenos a partir de los
cuales en un ciclo redox se originan SOR que inducen daño oxidativo (Cavalieri et al. 1997; Yager and Liehr 1996). El SNP rs4646903 en la secuencia de CYP1A1 esta
relacionado con el incremento de la actividad catalítica de la enzima (Cosma et al. 1993; Crofts et al.
1994; Landi et al. 1994).
Se ha propuesto que este SNP podría facilitar la estabilidad del
transcrito de ARN.
En general, variaciones genéticas en enzimas
relacionadas con la homeostasis del colesterol, el estrés oxidativo y los
estrógenos podrían estar relacionados con la patogénesis de la EA; sin embargo,
estos polimorfismos, con la excepción del alelo APOEe4,
todavía no han sido bien estudiados en asociación con el riesgo de DCLa. Por lo
tanto, uno o más genes candidatos mencionados anteriormente (APOE, CYP46A1, OGG1,
CYP17A1 y CYP1A1) podrían incrementar el riesgo de DCLa y EA.
En
este artículo se analiza la relación entre el alelo APOEε4, los SNPs rs754203 de CYP46A1,
rs1052133 de OGG1; rs743572 de CYP17A1 y rs4646903 de CYP1A1 y una mayor probabilidad de DCLa y EA.
Materiales y
métodos
Sujetos
El análisis de los genes APOE,
CYP46A1, OGG1, CYP17A1 y CYP1A1 se ha realizado en un
total de 551 sujetos, distribuidos en tres grupos: pacientes con DCLa (n=158),
EA (n=163) y controles sanos (n=230). Todos los sujetos fueron prospectivamente
reclutados del Servicio de Neurología de diversos hospitales. La selección de
los pacientes, los criterios de inclusión, exclusión y diagnóstico han sido
publicados previamente por Martínez et al
(2009)(Martinez et al. 2009).
Análisis genético
Se tomaron muestras de sangre periférica de todos los individuos mediante tubos Vacutainer® con anticoagulante EDTA. El ADN genómico fue extraído por lisis proteolítica y purificado mediante fenol/cloroformo seguido de precipitación con etanol. Los análisis genéticos se llevaron a cabo sin conocimiento previo del diagnóstico (DCLa, EA y los controles sanos). Los SNPs de rs1052133 (OGG1), rs743572 (CYP17A1) y rs4646903 (CYP1A1), se genotiparon mediante ensayos TaqMan ® de Discriminación Alélica en un ABI PRISM ® 7000 SDS. Las condiciones de termociclado a las que todos los ensayos podían ser realizados fueron los siguientes: 95 º C durante 10 min, 50 ciclos a 95 º C durante 15 seg y 58 º C durante 1 min 30 seg.
El SNP rs754203 (CYP46A1) se genotipó
siguiendo el protocolo de RFLPs publicado por Fernández del Pozo et al. (2006) (Fernandez Del Pozo et al. 2006). El gen APOE fue amplificado
por PCR con los primers 112F y 158R, en las condiciones de PCR descritas por
Wilton y Lim (1995)(Wilton and Lim 1995). La digestión del amplificado se
realizó con las enzimas de restricción Hae II y Afl III como describe Álvarez-Álvarez
et al (2003)(Alvarez-Alvarez et al. 2003).
Análisis
estadístico
Se utilizó el programa Genepop versión 4.0 para testar la bondad del
ajuste al equilibrio de Hardy-Weinberg mediante el test exacto de Guo-Thompson (Guo and Thompson 1992). El test G ha sido usado para
chequear frecuencias alélicas y genotípicas. Se realizaron análisis
estadísticos mediante la versión 15.0 del paquete estadístico SPSS®. Mediante
ANOVA se compararon las edades de los grupos a estudio. Se codificó cada
polimorfismo analizado como una variable dicotómica y de “presencia” o
“ausencia” en el caso del alelo APOEε4.
Se han realizado diversas regresiones logísticas multinomiales con
objeto de determinar el efecto independiente de los alelos considerados de
riesgo en cada SNP analizado (rs754203 (C), rs1052133
(G), rs743572 (G) y rs4646903 (C)) y el alelo APOEε4.
Además, se han creado otros modelos para evaluar el efecto combinado de los
alelos considerados de riesgo en los SNPs de los genes candidatos y el alelo
APOEε4, basándonos en la hipótesis de que estos SNPs podrían tener algún
efecto únicamente en los portadores de este alelo. Estos cálculos han sido
realizados considerando la edad y el sexo de las muestras como co-variables.
Los valores de p<0,05 se consideraron estadísticamente significativos.
Resultados
Hemos investigado la asociación independiente y
combinada de polimorfismos en genes candidatos rs754203 (CYP46A1), OGG1 (rs1052133), rs743572 (CYP17A1) y rs4646903 (CYP1A1) y APOE
mediante un diseño de casos y controles.
En este análisis hemos estudiado dos tipos de muestras
de pacientes, DCLa y EA, así como controles sanos. Los tres grupos están
formados mayoritariamente por mujeres. No tienen diferencias relacionadas con
la edad (p>0.05) (tabla 1).
Grupo |
N |
Edada |
Mujeres (%)b |
DCLa |
158 |
70.89 ± 7.40 |
53.8 |
EA |
163 |
74.94 ± 7.26 |
73.6 |
CONTROLES |
230 |
72.75 ± 9.58 |
56.5 |
Tabla 1. Datos demográficos. a Años, media
± desviación estándar (SD). b % mujeres en el grupo.
Table 1. Demographics. a Years, mean ± standard deviation (SD). b%
women in the group
La tabla 2 muestra las frecuencias alélicas y
genotípicas de los SNPs estudiados en los genes candidatos. Se observan
diferencias estadísticamente significativas únicamente en las frecuencias
genéticas y genotípicas de APOE entre los grupos de pacientes (DCLa y
EA) y controles (p<0.001). Todos los SNPs cumplían con el equilibrio de
Hardy Weinberg salvo APOE en el grupo de EA, por lo este alelo puede
estar relacionado con la EA. Los alelos menos representados de los SNPs
estudiados en los genes candidatos en el grupo control son considerados de
riesgo (rs754203 (C), rs1052133 (G), rs743572 (G) y rs4646903 (C)).
|
|
DCLa (N=158) |
EA (N=163) |
CONTROLES
(N=230) |
|
|||||
APOE |
|
|
|
|
|
|||||
Alelo |
2 |
0.028 |
0.034 |
0.059 |
|
|||||
3 |
0.725 |
0.647 |
0.841 |
|
||||||
4 |
0.247 |
0.319 |
0.100 |
|
||||||
Genotipo |
2.2 |
0.000 |
0.000 |
0.009 |
|
|||||
2.3 |
0.044 |
0.049 |
0.091 |
|
||||||
2.4 |
0.013 |
0.018 |
0.009 |
|
||||||
3.3 |
0.544 |
0.417 |
0.700 |
|
||||||
3.4 |
0.316 |
0.411 |
0.191 |
|
||||||
4.4 |
0.082 |
0.104 |
0.000 |
|
||||||
H-Wa |
p-Value |
>0.05 |
<0.05 |
>0.05 |
|
|||||
CYP46A1 |
rs754203 |
|
|
|
|
|||||
Alelo |
C |
0.237 |
0.224 |
0.272 |
|
|||||
T |
0.763 |
0.776 |
0.728 |
|
||||||
Genotipo |
CC |
0.051 |
0.043 |
0.061 |
|
|||||
TC |
0.373 |
0.362 |
0.422 |
|
||||||
TT |
0.576 |
0.595 |
0.517 |
|
||||||
H-Wa |
p-Value |
>0.05 |
>0.05 |
>0.05 |
|
|||||
OGG1 |
rs1052133 |
|
|
|
|
|||||
Alelo |
G |
0.225 |
0.150 |
0.233 |
|
|||||
C |
0.775 |
0.850 |
0.767 |
|
||||||
Genotipo |
GG |
0.044 |
0.012 |
0.061 |
|
|||||
GC |
0.361 |
0.276 |
0.343 |
|
||||||
CC |
0.595 |
0.712 |
0.596 |
|
||||||
H-Wa |
p-Value |
>0.05 |
>0.05 |
>0.05 |
|
|||||
|
CYP17A1 |
rs743572 |
|
|
|
|||||
|
Alelo |
G |
0.364 |
0.420 |
0.433 |
|||||
|
A |
0.636 |
0.580 |
0.567 |
||||||
|
Genotipo |
GG |
0.152 |
0.166 |
0.174 |
|||||
|
AG |
0.424 |
0.509 |
0.517 |
||||||
|
AA |
0.424 |
0.325 |
0.309 |
||||||
|
H-Wa |
p-Value |
>0.05 |
>0.05 |
>0.05 |
|||||
|
CYP1A1 |
rs4646903 |
|
|
|
|||||
|
Alelo |
C |
0.117 |
0.098 |
0.091 |
|||||
|
T |
0.883 |
0.902 |
0.909 |
||||||
|
Genotipo |
CC |
0.019 |
0.018 |
0.017 |
|||||
|
TC |
0.196 |
0.160 |
0.148 |
||||||
|
TT |
0.785 |
0.822 |
0.835 |
||||||
|
H-Wa |
p-Value |
>0.05 |
>0.05 |
>0.05 |
|||||
Tabla 2. Frecuencias
alélicas y genotípicas de los SNP estudiados en los genes candidatos. a
Equilibrio Hardy Weinberg.
Table 2. Allelic and genotypic frequencies of SNPs in
candidate genes. a Hardy Weinberg equilibrium.
La presencia del alelo APOEε4 es un factor de
riesgo para DCLa y EA (OR=2,67 (IC95% 1.69-4.21), p<0.001) y OR=4.75 (IC95%
3.02-7.47), p<0.001). Por el contrario, el resto de los alelos menos
frecuentes de los SNPs estudiados en los genes candidatos no son factores de
riesgo para el DCLa y la EA (tabla 3).
Gen / SNP |
Genotipo |
Grupo |
|
Riesgo |
|
|
|
|
OR |
IC95% |
p-value |
APOE |
2.2 + 2.3 +
3.3 |
|
Ref. |
|
|
|
2.4 + 3.4 + 4.4 |
EA |
4.75 |
(3.02-7.47) |
<0.001 |
|
DCLa |
2.67 |
(1.69-4.21) |
<0.001 |
|
CYP46A1
rs754203 |
TT |
|
Ref. |
|
|
|
TC+CC |
EA |
0.71 |
(0.47-1.06) |
>0.05 |
|
DCLa |
0.77 |
(0.51-1.16) |
>0.05 |
|
OGG1 rs1052133 |
CC |
|
Ref. |
|
|
|
GC+GG |
EA |
0.60 |
(0.48-1.12) |
>0.05 |
|
DCLa |
0.93 |
(0.64-1.49) |
>0.05 |
|
CYP17A1 rs743572 |
AA |
|
Ref. |
|
|
|
AG+GG |
EA |
0.93 |
(0.60-1.44) |
>0.05 |
|
DCLa |
0.93 |
(0.61-1.42) |
>0.05 |
|
CYP1A1
rs4646903 |
TT |
|
Ref. |
|
|
|
TC+CC |
EA |
1.13 |
(0.66-1.93) |
>0.05 |
|
DCLa |
1.38 |
(0.81-2.32) |
>0.05 |
Tabla 3. Odd ratio de los alelos menos frecuentes de los polimorfismos estudiados
en los genes candidatos. *El OR se ha calculado considerando como covariables
el sexo y la edad.
Table 3. Less
represented alleles odd ratio of polymorphisms
in candidate genes studied.
* OR was estimated
taking as covariates sex and age.
Con el objetivo de determinar si la presencia del
alelo APOEε4 condiciona los valores de OR para los SNPs analizados, se han
realizado los mismos cálculos en los pacientes no portadores de este alelo. No
se ha obtenido ningún dato significativo, por lo que ninguno de los SNPs
analizados es un factor de riesgo independiente salvo el alelo APOEε4
(p>0.05) (datos no mostrados). No obstante, estos SNPs podrían en
combinación con el alelo APOEε4 incrementar el riesgo de DCLa y EA. Por
ello, se ha realizado el cálculo del OR de cada alelo considerado de riesgo de
los SNPs analizados en los portadores de al menos un alelo APOEε4. La
tabla 4 muestra que la combinación de los alelos de riesgo y la presencia del
alelo APOE*ε4 no incrementa el riesgo de DCLa ni el de EA.
En general se observa que el único factor de riesgo
para DCLa y EA es el alelo APOEε4.
Gen / SNP |
Genotipo |
Grupo |
|
Riesgo |
|
|
|
|
OR |
IC95% |
p-value |
CYP46A1
rs754203 |
TT*ε4 |
|
Ref. |
|
|
|
(TC+CC)*ε4 |
EA |
1.37 |
(0.63-2.96) |
>0.05 |
|
DCLa |
1.22 |
(0.58-2.56) |
>0.05 |
|
OGG1 rs1052133 |
CC*ε4 |
|
Ref. |
|
|
|
(GC+GG)*ε4 |
EA |
2.11 |
(0.98-4.54) |
>0.05 |
|
DCLa |
0.86 |
(0.40-1.87) |
>0.05 |
|
CYP17A1 rs743572 |
AA*ε4 |
|
Ref. |
|
|
|
(AG+GG)*ε4 |
EA |
0.59 |
(0.26-1.34) |
>0.05 |
|
DCLa |
0.47 |
(0.20-1.10) |
>0.05 |
|
CYP1A1
rs4646903 |
TT*ε4 |
|
Ref. |
|
|
|
(TC+CC)*ε4 |
EA |
1.60 |
(0.61-4.90) |
>0.05 |
|
DCLa |
1.12 |
(0.41-2.99) |
>0.05 |
Tabla 4. Efecto combinado del alelo APOEε4 con los alelos menos frecuentes
de los polimorfismos estudiados en los genes candidatos. *El OR se ha calculado
considerando como covariables el sexo y la edad.
Table 4. Combined effect of APOEε4 allele with the less
represented alleles of polymorphisms in candidate
genes studied. * OR was estimated taking as covariates
sex and age.
Discusión
Nuestro estudio muestra que los SNPs analizados en los
genes candidatos (rs754203 en CYP46A1,
rs1052133 en OGG1,
rs743572 en CYP17A1 y rs4646903 en CYP1A1) no son factores de
riesgo independiente de DCLa y EA. Por el contrario, el alelo APOEe4 es un factor de
riesgo independiente. La presencia del alelo APOEe4 no modifica la ausencia de asociación entre
los alelos considerados de riesgo analizados en los genes candidatos y el DCLa
y la EA.
El alelo APOEε4
es el mayor factor de susceptibilidad de la EA (Busse et al. 2006) y de conversión de DCLa a EA (Devanand et al. 2005; Fleisher et al. 2007). El
alelo APOEε4 se asocia con un deterioro en las regiones críticas del
cerebro implicadas en la memoria, probablemente debido a la atrofia cerebral.
Se ha observado que el alelo APOEε4 contribuye a la patogénesis
participando en la producción y eliminación del péptido beta-amiloide (Aβ)
(Deane et al.
2008; Jiang et al. 2008; Ye et al. 2005). Los acúmulos extracelulares de Aβ junto a la acumulación
intracelular de los ovillos neurofibrilares son la característica
neuropatológicas principal en los cerebros de enfermos de EA (Duyckaerts et al. 2009).Los pacientes con DCLa de nuestro estudio tienen un
frecuencia del alelo APOEε4 ligeramente menor a la de los pacientes con
EA, en consonancia con estudios previos en población caucásica (Fernandez Del Pozo et al. 2006; Pesaresi et al.
2006). Además, se observa que el riesgo de DCLa es la
mitad que el referido de la EA entre los portadores del alelo APOEε4.
Varias publicaciones han investigado el efecto de los polimorfismos en CYP46A1 sobre el riesgo de EA. El SNP rs754203 es uno de los más estudiados. Con pocas excepciones (Chalmers et al. 2004; Desai et al. 2002; Ingelsson et al. 2004; Johansson et al. 2004; Juhasz et al. 2005; Kabbara et al. 2004; Tedde et al. 2006), la mayoría de los estudios parecen indicar que existe una asociación entre este SNP y la EA (Borroni et al. 2004; Combarros et al. 2004; Fernandez Del Pozo et al. 2006; Helisalmi et al. 2006; Kolsch et al. 2002; Li et al. 2006; Papassotiropoulos et al. 2003; Wang et al. 2004). No obstante, estos estudios difieren entre el alelo asociado a la EA. Por una parte, se han publicado datos de la asociación del alelo T con la población caucásica (Fernandez Del Pozo et al. 2006; Papassotiropoulos et al. 2003) y asiática (Wang et al. 2004). Por el otro, diversos estudios que han observado una asociación entre el alelo C aisladamente (Borroni et al. 2004; Combarros et al. 2004; Helisalmi et al. 2006; Kolsch et al. 2002) y en combinación con el alelo APOEε4 y la EA (Golanska et al. 2009; Golanska et al. 2005; Papassotiropoulos et al. 2003). Respecto al último grupo de estudios, nuestros datos difieren al no observarse asociación alguna entre el alelo C y la EA, aún en presencia del alelo APOEε4.
A pesar de que Vodicka et al. (Vodicka et al.
2007) demostraron que la capacidad de eliminación
de bases 8-OHG de la enzima 8 oxoguanina ADN glicosilasa estaba disminuida en
los portadores sanos del homocigoto (GG) del SNP rs1052133 al compararlos con
el genotipo CC, la ausencia de asociación entre este SNP y la EA apoya estudios
previos (Coppede et al. 2007; Dorszewska et
al. 2009; Parildar-Karpuzoglu et al. 2008). La frecuencia del alelo G observada
en nuestro grupo de controles caucásicos es superior a la observada por Coppede
et al. (2007) y Dorsewska et al. (2009) (0.233 frente a 0.190 y
0.210, respectivamente). Sin embargo, es muy parecida a la observada por
Parildar-Karpuzoglu et al. (2008) en
una población Turca (0.24).
Nuestros resultados no muestran una asociación entre el SNP rs1052133,
relacionado con una disminución de la actividad de la enzima codificada por OGG1,
y el DCLa y la EA, se ha sugerido que se produce una disminución de la actividad
de la 8 oxoguanina glicosilasa 1 en las etapas iniciales de progresión a EA.
Este hecho podría ocasionar un incremento de 8-OHdG en el cerebro de pacientes
con DCLa y EA(Shao et al. 2008). Aunque nuestros resultados no
apoyan un mayor riesgo de DCLa y EA ocasionado por este SNP.
El trabajo publicado por Wang et al. (2005) (Wang et al. 2005) es el único estudio publicado que muestra datos sobre la ausencia de asociación de los polimorfismos rs743572 (CYP17A1) y rs4646903 (CYP1A1) de forma conjunta en pacientes de EA, aunque con un origen asiático. Nicholl et al. (1999) (Nicholl et al. 1999) publicaron en población caucásica la misma ausencia de relación entre el SNP rs743572 y los pacientes con EA. Nuestros datos aportan nuevos resultados sobre el análisis de estos SNPs en población caucásica y confirman la ausencia de asociación previamente observada.
En general, la ausencia de asociación observada en el análisis de SNPs en los genes candidatos en pacientes con EA, se mantiene también en los pacientes con DCLa. Además, estos resultados no se han modificado aún cuando se estratificó por la presencia del alelo APOEε4. Por lo que los polimorfismos no parece que se vinculen a la etapa prodrómica de la EA, el DCLa.
Varias fortalezas se reconocen en nuestro estudio, 1)
el estudio tiene un carácter multicéntrico incluyendo pacientes con EA, DCLa y
controles, 2) por primera vez se presentan resultados del análisis de los genes
CYP46A1, OGG1, CYP17A1 y CYP1A1 en pacientes de
DCLa. Sin embargo, es necesario aproximarse a nuestros resultados con cierta
cautela, ya que se observa una falta de poder estadístico para un α=0.05
en los SNPs estudiados en los genes candidatos CYP46A1, OGG1, CYP17A1
y CYP1A1 entre los grupos de pacientes y controles. No obstante, el
estudio tiene suficiente poder estadístico para evaluar el riesgo conferido por
el alelo APOEε4
en los portadores (>90%).
En conclusión, los SNPs estudiados en los genes candidatos (rs754203 de CYP46A1, rs1052133 de OGG1; rs743572 de CYP17A1 y rs4646903 de CYP1A1) no son factores de riesgo independiente para
DCLa y EA, excepto el alelo APOEε4 de APOE. Además, la ausencia de
asociación de estos SNPs se mantiene aún tras realizar la estratificación del
grup de DCLa y EA por la presencia del alelo APOEε4.
Agradecimientos. Los
autores agradecen el apoyo técnico y humano recibido de los SGIker (UPV/EHU,
MICINN, GV/EJ, FEDER y FSE), la Federación de Asociaciones de Familiares de
enfermos de Alzheimer de Euskadi, el Fondo de Investigaciones Sanitaria del
Instituto Carlos III (Madrid), la Pfizer Foundation y las Ayudas a la
Investigación de la Obra Social de la Caja Vital Kutxa.
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